IRMM-311 地衣芽孢桿菌基因組標(biāo)準(zhǔn)品樣品描述每個(gè)小瓶包含一個(gè)瓊脂糖插入的地衣芽孢桿菌DSM 5749未消化的基因組DNA，用于PFGE。

本CRM旨在用于PFGE公司授權(quán)的益生菌飼料添加劑地衣芽孢桿菌DSM 5749的分類鑒定。所有程序中均應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)（無(wú)菌、無(wú)DNA酶、RNA酶）消耗品和生物化學(xué)物質(zhì)。

用SfiI限制性內(nèi)切酶消化瓊脂糖插入物

-將IRMM-311的瓊脂糖插入物轉(zhuǎn)移到含有1 mL 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.6)的1.5 mL試管中，并在室溫下孵育30 min。

-取出溶液，再加入1 mL 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.6)，在室溫下再次孵育30 min。

-在不破壞插頭的情況下刪除解決方案。

-在室溫下插入兩次30 min的0.5 mL RE緩沖液中(使用RE和制造商選擇的適當(dāng)緩沖液)。更新中間位置之間的限制緩沖區(qū)。

-刪除限制性緩沖區(qū)。

-添加到每個(gè)插入物：30μL 10×濃縮SfiI緩沖液，30 U SfiI，添加水到最終體積為300μL。

-在50°C下孵育15-17小時(shí)。

-小心除去溶液，加入1 mL ES溶液（0.5MEDTA pH 8.0,1%（m/v）月桂酰肌氨酸鈉）。

-在50下孵育過(guò)夜°C.

-取出溶液，加入250μL ESP(含蛋白酶K的ES，1 mg/mL)。

-在50時(shí)孵育2小時(shí)°C.-稀釋三硼酸鹽-EDTA(TBE)緩沖液(89 mmol/L三硼酸鹽，2 mmol/L EDTA，pH 8.3)，例如SigmaT7527，與體積比為1：3的蒸餾水（緩沖液：水）。

-除去溶液，加入1 mL稀釋的TBE緩沖液，在室溫下孵育1小時(shí)。插入物可以在4°C中保存幾天。

-取每個(gè)PFGE標(biāo)準(zhǔn)品D2291和D2416的1 mm瓊脂糖插入片，在1 mL稀釋的TBE中室溫孵育1小時(shí)。

存儲(chǔ)

IRMM-311 地衣芽孢桿菌基因組標(biāo)準(zhǔn)品樣品在使用前應(yīng)存儲(chǔ)在4°C下。然而，歐盟委員會(huì)不能對(duì)在客戶的場(chǎng)所儲(chǔ)存材料期間發(fā)生的變化負(fù)責(zé)，特別是對(duì)打開的樣品。

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